定義

過敏反應(yīng)又稱變態(tài)反應(yīng)，是指機(jī)體受同一抗原再刺激后產(chǎn)生的一種表現(xiàn)為組織損傷或生理功能紊亂的特異性免疫反應(yīng)，是異?；虿±硇悦庖叻磻?yīng)。過敏性試驗(yàn)是觀察動(dòng)物接觸受試物后的全身或局部過敏反應(yīng)。

特點(diǎn)

過敏反應(yīng)有以下特點(diǎn)：①其組織損傷不同于一般毒性反應(yīng)，表現(xiàn)為變態(tài)反應(yīng)性炎癥；②初次接觸抗原后可不出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，但經(jīng)過一定時(shí)間后再次接觸同一物質(zhì)，即可出現(xiàn)明顯反應(yīng)。③無明顯劑量-效應(yīng)關(guān)系，有時(shí)很小劑量就可出現(xiàn)劇烈反應(yīng)。

分類

1963年，Gell與Coombs將過敏反應(yīng)按其機(jī)制分為四類。

I型又稱快發(fā)或速發(fā)過敏型（anaphylactic sensitivity）

由IgE介導(dǎo)。當(dāng)機(jī)體初次接觸過敏原后，可產(chǎn)生IgE抗體。通過其Fc段結(jié)合于肥大細(xì)胞或嗜堿性細(xì)胞表面，使機(jī)體產(chǎn)生致敏狀態(tài)。當(dāng)處于致敏狀態(tài)的機(jī)體再次接觸該過敏原時(shí)，即與細(xì)胞表面的IgE結(jié)合，使細(xì)胞脫顆粒，并釋放多種炎性活性物質(zhì)，導(dǎo)致毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增加、腺體分泌增多及平滑肌收縮等一系列病理變化。臨床主要表現(xiàn)為蕁麻疹、過敏性休克、支氣管哮喘、變應(yīng)性鼻炎、胃腸道與皮膚過敏反應(yīng)等。

II型又稱細(xì)胞毒型或溶細(xì)胞型（antibody dependent cytotoxic hypersensitivity）

由IgG或IgM介導(dǎo)。主要靶細(xì)胞為帶抗原的組織細(xì)胞，如紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、腎小球血管基底膜細(xì)胞、皮膚細(xì)胞、肝細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及部分內(nèi)分泌細(xì)胞等。當(dāng)抗體與靶細(xì)胞表面抗原結(jié)合后，通過活化補(bǔ)體、巨噬細(xì)胞及NK細(xì)胞，引起細(xì)胞毒作用，導(dǎo)致細(xì)胞損傷。主要表現(xiàn)為庫(kù)姆斯實(shí)驗(yàn)陽性的溶血性貧血、粒細(xì)胞減少和血小板減少性紫癜。

III型又稱免疫復(fù)合型或血管炎型（complex-mediated hypersensitivity）

由IgG、IgM介導(dǎo)。由于抗原-抗體復(fù)合物在組織中沉積而引發(fā)的炎癥反應(yīng)，通過活化補(bǔ)體、嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)釋放出的水解酶，造成組織損傷。主要表現(xiàn)為局限性肺炎、血管炎、狼瘡樣反應(yīng)、腎小球腎炎等。

IV型又稱遲發(fā)型或結(jié)核菌素型（cell-mediated hypersensitivity）

由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的過敏反應(yīng)。當(dāng)特異性抗原與TD細(xì)胞或TK細(xì)胞接觸后，淋巴細(xì)胞致敏產(chǎn)生特異性抗體。當(dāng)再次接觸抗原時(shí)，TD細(xì)胞即可釋放淋巴因子，吸引并激活巨噬細(xì)胞，從而引起細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)，誘發(fā)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。主要表現(xiàn)為接觸性皮炎及濕疹。

光敏性包括光毒性（光刺激性）和光過敏性（光變態(tài)反應(yīng)）兩類，光毒性是由光誘導(dǎo)的非免疫性的皮膚對(duì)光的反應(yīng)，藥物可通過直接作用或通過血循環(huán)間接作用。光過敏性是獲得性的免疫性介導(dǎo)的由光激活的皮膚對(duì)光的反應(yīng)，系光感物質(zhì)經(jīng)皮吸收或通過循環(huán)到達(dá)皮膚后與吸收的光線在表皮細(xì)胞層發(fā)生的反應(yīng)，為IV型過敏反應(yīng)的特殊類型。

過敏性試驗(yàn)方法

1.主動(dòng)全身過敏試驗(yàn)（ASA）

基本原理：主動(dòng)全身過敏試驗(yàn)是給致敏成立的動(dòng)物靜脈注射抗原，觀察抗原與IgE抗體結(jié)合后導(dǎo)致肥大細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞脫顆粒、釋放活性介質(zhì)而致的全身性過敏反應(yīng)。

通常選用體重為300～400克的豚鼠。每組動(dòng)物數(shù)至少6只。設(shè)陰性、陽性對(duì)照組和受試物不同劑量組，至少包括臨床擬用最高劑量或濃度。陰性對(duì)照組給予同體積的溶媒，陽性對(duì)照組給予牛血清白蛋白或卵白蛋白或已知致敏陽性物質(zhì)。

選擇容易產(chǎn)生抗體的給藥途徑，如腹腔、靜脈或皮下注射，隔日一次，共給藥3次，給藥體積0.5 ml，末次注射后第14天、第21天分別快速靜脈注射致敏劑量的2倍進(jìn)行攻擊。即刻觀察動(dòng)物反應(yīng)至30分鐘，包括癥狀的出現(xiàn)及消失時(shí)間，一般應(yīng)觀察3小時(shí)。致敏期間每日觀察動(dòng)物的癥狀，首末次致敏和激發(fā)當(dāng)日測(cè)定動(dòng)物體重。按表2判斷過敏反應(yīng)發(fā)生程度，計(jì)算發(fā)生率。

表1過敏反應(yīng)癥狀

表2 全身致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2.主動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)（ACA）

通常選豚鼠。受試物應(yīng)與臨床擬用制劑一致，應(yīng)為含活性成分和賦形劑或含透皮促進(jìn)劑的混合制劑。若受試物為膏劑或液體，則一般不稀釋；若受試物為固體粉末，則需與適量水或賦形劑混勻，以保證受試物與皮膚的良好接觸。當(dāng)使用賦形劑時(shí)，應(yīng)考慮其對(duì)受試物透皮吸收的影響。應(yīng)設(shè)陽性對(duì)照和陰性或賦形劑對(duì)照。在致敏接觸階段，應(yīng)充分保證受試物在皮膚的停留時(shí)間（6小時(shí)）和接觸皮膚的范圍。第0、第7和第14天，同樣方法給藥。末次給藥后14天，再次給藥激發(fā)，給藥6小時(shí)左右后，觀察72小時(shí)內(nèi)皮膚過敏反應(yīng)情況，并按表3評(píng)分，按表4計(jì)算發(fā)生率。同時(shí)應(yīng)觀察動(dòng)物是否有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等全身過敏反應(yīng)。

表3 皮膚過敏反應(yīng)程度的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表4 皮膚致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

3.被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)（PCA）

定義及基本原理：被動(dòng)皮膚過敏實(shí)驗(yàn)（PCA）是將致敏動(dòng)物的血清（內(nèi)含豐富的IgE抗體）皮內(nèi)注射于正常動(dòng)物。IgE與皮膚肥大細(xì)胞的Fcδ受體結(jié)合，使之被動(dòng)致敏。當(dāng)致敏抗原激發(fā)時(shí)，引起局部肥大細(xì)胞釋放過敏介質(zhì)，從而使局部血管的通透性增加，注入染料可滲出于皮丘，形成一個(gè)藍(lán)斑。根據(jù)藍(lán)斑范圍或分光光度計(jì)法測(cè)定，判定過敏反應(yīng)程度。

通常選大鼠，可用小鼠，有時(shí)根據(jù)試驗(yàn)需要用豚鼠，選擇動(dòng)物時(shí)應(yīng)考慮IgE的出現(xiàn)時(shí)間。每組動(dòng)物數(shù)至少6只。應(yīng)設(shè)立陰性、陽性對(duì)照組和受試物不同劑量組，至少包括臨床擬用最大劑量或濃度。陰性對(duì)照組應(yīng)給予同體積的溶媒，陽性對(duì)照組給予牛血清白蛋白或卵白蛋白或已知致敏陽性物質(zhì)。

選擇容易產(chǎn)生抗體的給藥方法，如靜脈、腹腔或皮下注射等，隔日一次，共給藥3～5次；末次致敏后第10～14天制備致敏血清。激發(fā)時(shí)動(dòng)物備皮處皮內(nèi)注射合適稀釋度的致敏血清0.1mL，24或48小時(shí)后，靜脈注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原加等量的0.5%～1%伊文思蘭染料共1mL。由于不同種屬動(dòng)物接受含IgE抗體血清后，至能夠應(yīng)答抗原攻擊產(chǎn)生過敏反應(yīng)的時(shí)間不同，需注意激發(fā)時(shí)間選擇的合理性。激發(fā)注射30分鐘后測(cè)量皮膚內(nèi)層的斑點(diǎn)大小，直徑大于5mm者為陽性。不規(guī)則斑點(diǎn)的直徑為長(zhǎng)徑與短徑之和的一半，并提供藍(lán)斑照片。

4.豚鼠Buehler試驗(yàn)（BT）和最大化試驗(yàn)（GPMT）

通常選成年豚鼠。受試物組不少于20只、對(duì)照組不少于10只。應(yīng)設(shè)立陰性對(duì)照組和陽性對(duì)照組。推薦的陽性對(duì)照物有巰基苯并噻唑，苯佐卡因，二硝基氯苯，331環(huán)氧樹脂等，也可以使用其他的陽性對(duì)照物，但輕－中度的致敏劑在加佐劑的試驗(yàn)中至少30%和不加佐劑試驗(yàn)中至少15%應(yīng)有反應(yīng)。

取決于所選擇的方法。在Buehler試驗(yàn)中，致敏劑量應(yīng)當(dāng)足夠高，以產(chǎn)生輕微的刺激性，激發(fā)劑量為不產(chǎn)生刺激性的最高劑量。在GPMT試驗(yàn)中，致敏劑量應(yīng)足夠高以產(chǎn)生輕－中度的皮膚刺激性且能很好地全身耐受，激發(fā)劑量為不產(chǎn)生刺激性的最高劑量。第0，6～8和13～15天局部給藥誘導(dǎo)，第27～28天在未給藥部位給藥6小時(shí)激發(fā)。GMPT試驗(yàn)采用皮內(nèi)注射給藥，使用或者不使用佐劑進(jìn)行誘導(dǎo)，局部誘導(dǎo)5～8天后，第20～22天給予激發(fā)劑量24小時(shí)，在去除激發(fā)劑量24和48小時(shí)后讀取結(jié)果。兩種試驗(yàn)方法均在去除藥物24和48小時(shí)后讀取結(jié)果。如結(jié)果難以判定，一周后再次激發(fā)。

一般在致敏后1和24小時(shí)及激發(fā)后24和48小時(shí)觀察皮膚紅斑、水腫和其他異常反應(yīng)，按表5進(jìn)行評(píng)分，計(jì)算過敏反應(yīng)發(fā)生率。按表6判斷過敏反應(yīng)強(qiáng)度?？筛鶕?jù)毒性反應(yīng)情況適當(dāng)調(diào)整觀察時(shí)間。同時(shí)測(cè)定開始和結(jié)束時(shí)的動(dòng)物體重。

表5 皮膚反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表6 致敏強(qiáng)度

5.皮膚光過敏反應(yīng)試驗(yàn)

定義：光過敏性是在局部或全身接觸某些藥物或化學(xué)物后，再暴露于太陽光下可導(dǎo)致類似過敏的反應(yīng)，屬IV型遲發(fā)型過敏反應(yīng)，需要經(jīng)過誘導(dǎo)及激發(fā)階段。臨床表現(xiàn)為急性蕁麻疹、持續(xù)性濕疹或遲發(fā)性皰疹，且經(jīng)常波及太陽光未照射部位的皮膚。

產(chǎn)生這些作用的藥物或化學(xué)物，均具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)，吸收光能后成激活狀態(tài)，并以半抗原形式與皮膚中的蛋白結(jié)合成為藥物-蛋白質(zhì)結(jié)合物（全抗原），從而刺激抗體產(chǎn)生，經(jīng)表皮的朗格漢斯細(xì)胞呈遞給免疫活性細(xì)胞，引起過敏反應(yīng)。其發(fā)生時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，且有一定的潛伏期。通常5~10d的連續(xù)用藥和光照射可誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生光過敏反應(yīng)。再次給藥時(shí)，藥物和光照作用24~48h之內(nèi)即會(huì)有光過敏性反應(yīng)發(fā)生。 

皮膚光敏性試驗(yàn)是根據(jù)比較對(duì)照組和給藥組的反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。陽性結(jié)果時(shí)應(yīng)追加試驗(yàn)，如：與已知陽性物質(zhì)的比較試驗(yàn)及用其他方法（不加佐劑）進(jìn)行試驗(yàn)，其中非損傷性試驗(yàn)方法有利于光敏性反應(yīng)評(píng)價(jià)。另外，光敏性是光毒性和光過敏性兩類混合難分的反應(yīng)。必要時(shí)應(yīng)追加光毒性試驗(yàn)。試驗(yàn)動(dòng)物原則上選健康白色豚鼠，每組不少于5只。應(yīng)設(shè)陽性對(duì)照藥組、陰性對(duì)照組和受試物組。

實(shí)驗(yàn)方法：

Adjuvant and Strip法：皮內(nèi)注射FCA、損傷皮膚角質(zhì)層后涂敷受試物、照射紫外線，以上操作反復(fù)5次進(jìn)行致敏，2周后再次涂敷受試物，照射紫外線激發(fā)。

Harber法：涂敷受試物、照射紫外線，此操作隔日一次共3次致敏。3周后再次涂敷受試物，30分鐘后照射紫外線激發(fā)。

Horio法：涂敷20%月桂醇硫酸鈉，再涂敷受試物，立即照射紫外線，此操作每日一次共3次致敏。14天后再次涂敷受試物，照射紫外線激發(fā)。

Jordan法：破損皮膚涂敷受試物，1小時(shí)后照射紫外線，此操作每周5次，連續(xù)3周進(jìn)行致敏，2周后再涂敷受試物，6小時(shí)后照射紫外線，此操作連續(xù)2日進(jìn)行激發(fā)。

Maurer法：涂敷受試物，1小時(shí)后照射紫外線及可見光線進(jìn)行致敏。6周和9周后，各3日連續(xù)涂敷受試物，30分鐘后照射紫外線進(jìn)行激發(fā)。

Morikawa法：為Harber改良法，涂敷受試物，30分鐘后照射紫外線，此操作每周連續(xù)5天，共2周進(jìn)行致敏，致敏2周后，涂敷受試物，30分鐘后照射紫外線進(jìn)行激發(fā)。

Vinson法：涂敷受試物，照射紫外線，每日一次，連續(xù)5次致敏，7～10天后，再次涂敷受試物，照射紫外線激發(fā)。

進(jìn)行何種過敏性試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)藥物特點(diǎn)、臨床適應(yīng)癥、給藥方式、過敏反應(yīng)發(fā)生機(jī)制、影響因素等確定。

通常局部給藥發(fā)揮全身作用的藥物（如注射劑和透皮吸收劑等）需考察Ⅰ型過敏反應(yīng)，如注射劑需進(jìn)行主動(dòng)全身過敏試驗(yàn)（Active Systemic Anaphylaxis, ASA）和被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)（Passive Cutaneous Anaphylaxis, PCA），透皮吸收劑需進(jìn)行主動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)（Active Cutaneous Anaphylaxis, ACA）。吸入途徑藥物應(yīng)采用豚鼠吸入誘導(dǎo)和刺激試驗(yàn)。粘膜給藥應(yīng)結(jié)合受試物的特點(diǎn)參照經(jīng)皮給藥過敏性試驗(yàn)方法進(jìn)行。如受試物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與文獻(xiàn)報(bào)道產(chǎn)生其他過敏反應(yīng)的化合物相同或相似者建議考慮采取適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)方法以考察其是否能引起其他過敏反應(yīng)（如光過敏性反應(yīng)等）。Ⅱ和Ⅲ型過敏反應(yīng)可結(jié)合在重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中觀察，如癥狀、體征、血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及相關(guān)的病理組織學(xué)改變等。經(jīng)皮給藥制劑（包括透皮劑）應(yīng)進(jìn)行IV型過敏反應(yīng)試驗(yàn)，包括豚鼠最大化試驗(yàn)（Guinea-Pig Maximization Test, GPMT）或豚鼠封閉斑貼試驗(yàn)（BuehlerTest）或其他合理的試驗(yàn)方法如小鼠局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（Murine Local Lymph Node Assay, LLNA）等。

   參考文獻(xiàn)

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