同種異體植入性醫(yī)療器械和動物源性醫(yī)療器械作為高風(fēng)險醫(yī)療器械，產(chǎn)品的病毒滅活工藝控制尤為重要。未滅活的產(chǎn)品應(yīng)用到人體，會增加病毒傳播和免疫原性等方面的安全風(fēng)險，且存在材料表征上的困難?！夺t(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》及其配套附錄、現(xiàn)場檢查指導(dǎo)原則中均對醫(yī)療器械病毒滅活提出了明確的要求。

本檢查指南歸納了在相關(guān)醫(yī)療器械生產(chǎn)過程中，對特定病毒滅活工藝的效果進行驗證的一般要求，旨在幫助北京市醫(yī)療器械監(jiān)管人員增強對病毒滅活知識的了解和學(xué)習(xí)，提高全市醫(yī)療器械監(jiān)管人員對醫(yī)療器械病毒滅活過程的監(jiān)督檢查水平。同時，也為北京市相關(guān)醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)加強對醫(yī)療器械病毒滅活工藝的管理提供參考。醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)當(dāng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性，明確所采用的病毒滅活工藝及相關(guān)參數(shù)等要求的適宜性，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)和標準要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。

本指南中引用的國家相關(guān)法規(guī)、規(guī)章、標準、檢查指南等版本發(fā)生變化時，要以執(zhí)行的最新版為準。必要時，北京市藥品監(jiān)督管理局應(yīng)重新研究修訂，以確保本指南持續(xù)符合要求。

一、適用范圍

本檢查指南可作為北京市藥品監(jiān)督管理局組織、實施醫(yī)療器械注冊質(zhì)量管理體系現(xiàn)場核查、《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》現(xiàn)場核查、醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)督檢查等涉及同種異體植入性醫(yī)療器械、動物源性醫(yī)療器械病毒滅活工藝檢查的參考資料。

二、常用的病毒滅活方法

同種異體植入性醫(yī)療器械、動物源性醫(yī)療器械的病毒滅活有多種方法，企業(yè)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性選擇合適的病毒滅活工藝。采用病毒滅活工藝應(yīng)綜合考慮病毒滅活效果的驗證，病毒滅活工藝對產(chǎn)品性能的影響，病毒滅活工藝本身的公認性、可靠性、重現(xiàn)性、易放大性及經(jīng)濟性。常用的病毒滅活方法舉例如下。

（一）巴斯德消毒法（巴氏消毒法）

巴氏消毒法是濕熱滅活法之一，利用病毒不耐熱的特點，通過適當(dāng)溫度和保溫時間處理滅活病毒。該滅活方法可滅活脂包膜和部分非脂包膜病毒。采用該方法時應(yīng)考慮溫度分布的均一性和滅活時間。

（二）γ射線輻照滅活法

γ射線輻照滅活法是主要通過破壞核酸而滅活病毒，其優(yōu)點包括滅活效率高、穿透力強、劑量易控制、無有害物質(zhì)殘留、無明顯溫度升高等。采用該方法時應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性確定輻照劑量，考慮輻照劑量的分布和滅活時間。

（三）過氧乙酸-乙醇滅活法

過氧乙酸-乙醇滅活法可滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒、艾滋病病毒、偽狂犬病病毒、牛病毒性腹瀉病毒、豬細小病毒等多種病毒。過氧乙酸具有極強的病毒滅活能力，乙醇可降低溶液的表面張力，有助于消毒劑完全滲透入同種異體植入性醫(yī)療器械中。采用該方法時應(yīng)嚴格控制產(chǎn)品過氧乙酸殘留量及乙醇殘留量，考慮滅活實際濃度和滅活時間。

（四）乙醇滅活法

乙醇是臨床上最為常用的表面消毒劑。該方法對多數(shù)有包膜病毒，如單純皰疹病毒、艾滋病病毒等具有滅活作用。采用該方法時應(yīng)嚴格控制乙醇殘留量，考慮乙醇濃度和滅活時間。

在選擇病毒滅活工藝時，應(yīng)同時考慮該工藝對病毒的殺滅效果和對材料性能的損害程度。不同的產(chǎn)品類型需選擇進行滅活的病毒種類可能不同，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品本身特性及對病毒滅活方法的耐受性，選用合適的病毒滅活工藝，才能更好地保證其材料在使用中的安全性和有效性。

三、病毒滅活工藝的驗證

病毒滅活工藝有效性驗證研究通常是將已知種類和滴度的病毒，加入到待驗證工藝步驟處理前的模擬原材料或中間品中，然后經(jīng)工藝步驟處理后，定量測定指示病毒數(shù)量下降的幅度，由此評價生產(chǎn)工藝的去除/滅活病毒效果。需合理設(shè)計與實際生產(chǎn)工藝相關(guān)的病毒去除/滅活研究試驗方案。一般只對可能或預(yù)期具有病毒去除/滅活效果的一個或多個工藝步驟進行驗證，不必對每個生產(chǎn)工藝步驟都進行驗證。病毒滅活工藝有效性驗證應(yīng)滿足以下基本要求：

（一）指示病毒的選擇

需要選擇與實際生產(chǎn)用的同種異體植入性動物源性材料中可能含有的相關(guān)病毒，不能用相關(guān)病毒的，要選擇與其生物學(xué)機構(gòu)、理化性質(zhì)盡可能相似的指示病毒。根據(jù)產(chǎn)品的特性及所采用的病毒滅活工藝，至少應(yīng)選擇四類指示病毒，包括有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無包膜RNA病毒、無包膜DNA病毒，并且其中至少應(yīng)包含一種對物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。指示病毒初始滴度需要盡可能高（一般需≥106 TCID50/mL）

（二）病毒負載方法（染毒方法）

病毒滅活的有效性同原材料的結(jié)構(gòu)、尺寸和形狀以及病毒在原材料中的分布有關(guān)，同種異體植入性醫(yī)療器械和動物源性醫(yī)療器械多為固體形態(tài)，需盡量模擬生物材料的病毒負載方式，使負載的指示病毒充分而且均勻地浸入到材料的內(nèi)部，或采用其他對于去除效果更為不利的指示病毒負載方式。

（三）縮小規(guī)模的模型設(shè)計

為避免將任何病毒人為的引入實際生產(chǎn)設(shè)施，驗證工作應(yīng)在單獨的實驗室中進行，因此通常采用縮小規(guī)模的生產(chǎn)工藝來模擬實際生產(chǎn)工藝。采用縮小規(guī)模生產(chǎn)工藝的方法，需盡可能模擬真實生產(chǎn)過程，如病毒滅活試劑濃度、pH值、體積、溫度和反應(yīng)時間等。按照能代表去除和/或滅活病毒能力最差情況的條件進行設(shè)計。需分析生產(chǎn)工藝中各種參數(shù)的偏差對病毒去除/滅活效果的影響。

（四）對照設(shè)計

方案設(shè)計時，應(yīng)進行合理分組，注意設(shè)置全面的對照組，對照組的設(shè)計應(yīng)能夠用于判定病毒滅活效果，以確保結(jié)果的科學(xué)性。建議包括試驗組和對照組（細胞毒性對照組、病毒對照組、干擾對照、起始滴度對照、未處理對照、終止效果驗證對照組和細胞陰性對照）。試驗組至少應(yīng)有適宜的時間點（包括零時和2-3個過程取樣點），以闡明病毒滅活的動力學(xué)，包括病毒滅活動力學(xué)曲線。

（五）效果的判定

1.滅活降低系數(shù)的要求

病毒滅活有效性驗證的目的是為了確定生產(chǎn)工藝滅活病毒的能力，可以采用一步或多步病毒滅活工藝，因此需獲得生產(chǎn)全過程中估計滅活病毒的總降低系數(shù)。

一般每種指示病毒的總降低系數(shù)為各步驟降低系數(shù)的總和。但是由于驗證方法的局限性，如分步驟中指示病毒降低系數(shù)≤1 log，則不宜將其計算在總量中。

根據(jù)目前相關(guān)指導(dǎo)原則的規(guī)定，同種異體植入性醫(yī)療器械總降低系數(shù)宜達到4logs以上（即病毒數(shù)量下降到進行滅活前數(shù)量的萬分之一以下），動物源性醫(yī)療器械總降低系數(shù)宜達到6 logs以上（即病毒數(shù)量下降到進行滅活前數(shù)量的百萬分之一以下）。若采用多步不同滅活原理的病毒滅活工藝，應(yīng)分別進行病毒滅活效果驗證，并保證對于每一類指示病毒，原則上需至少有一步病毒滅活工藝的降低系數(shù)應(yīng)達到4 logs以上（如因檢測方法的靈敏度造成檢測出的病毒降低系數(shù)接近但小于4 logs時，應(yīng)盲傳三代，如無病毒檢出，亦可認為是有效地滅活病毒步驟）。

2.病毒滅活動力學(xué)要求

評價驗證結(jié)果不能僅考慮病毒降低量，同時也要考慮病毒滅活動力學(xué)。需以作圖的形式報告滅活動力學(xué)驗證結(jié)果。如果指示病毒殘留量很快降到最低檢出限度值，則說明此方法滅活病毒效果較好；如果指示病毒滅活速率緩慢，在滅活結(jié)束時才達到最低檢出限度值，則不能認為是一個有效的病毒滅活方法。

（六）其他需要注意的問題

1.如果樣品必須做進一步處理，或不同時間取出的樣品要在同一時間進行測定，應(yīng)考慮這些處理方法對病毒檢測結(jié)果的影響，必要時應(yīng)研究處理方法對病毒活性的影響。

2.模擬的生產(chǎn)工藝參數(shù)應(yīng)盡可能與實際的生產(chǎn)工藝相一致，如pH值、溫度、反應(yīng)時間、射線劑量等。應(yīng)分析生產(chǎn)工藝中各種參數(shù)的偏差對病毒滅活效果的影響。

3.對于同種異體植入性醫(yī)療器械，制造商應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝過程，考慮人免疫缺陷病毒（HIV）對病毒滅活工藝的滅活抗性，確保相應(yīng)剩余風(fēng)險可接受，并形成文件評審記錄。

4.對于YY/T 0771.1/ISO 22442-1《動物源醫(yī)療器械 第1部分：風(fēng)險管理應(yīng)用》附錄中提到的動物脂衍生物、動物炭和氨基酸，若證明其處理過程符合YY/T 0771.1/ ISO 22442-1 附錄中的相關(guān)要求，則可不提交進行病毒滅活有效性驗證。

5.如果采用總降低系數(shù)達6 logs的病毒滅活工藝將導(dǎo)致醫(yī)療器械產(chǎn)生不可接受的性能改變，則需要根據(jù)動物源性材料的來源、采集及處理過程控制情況以及對患者的風(fēng)險/受益分析來判斷其可接受性，但其單一去除病毒步驟的降低系數(shù)仍需達到4 logs以上，并形成文件評審記錄。

6.由于目前尚難以采用致病性朊蛋白（如傳染性海綿狀腦病因子）的指示因子對去除朊蛋白的工藝進行驗證，因此對牛、羊源性材料制品的傳染性海綿狀腦病安全性還主要是對源頭進行控制。隨著對朊蛋白研究水平的不斷提高，相應(yīng)的要求也將隨時調(diào)整。

滅活病毒和/或傳染性因子的處理步驟有可能是以犧牲材料本身的使用性能或增加新的風(fēng)險為代價的，生產(chǎn)企業(yè)需充分評估其對產(chǎn)品的不利影響，以保證產(chǎn)品最終能夠安全有效地使用。

病毒滅活工藝的驗證具體的內(nèi)容可參考《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年修訂版）》、《動物源性醫(yī)療器械注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2017年修訂版）》。

四、檢查要點

應(yīng)依據(jù)《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》及其附錄、醫(yī)療器械現(xiàn)場檢查指導(dǎo)原則的要求，結(jié)合待檢查產(chǎn)品的原材料特點、生產(chǎn)工藝要求、產(chǎn)品適用范圍及臨床使用方法等，開展病毒滅活工藝驗證內(nèi)容的檢查，重點檢查內(nèi)容如下：

（一）查看病毒滅活的驗證報告。報告是否采用有效的方法滅活、去除病毒和其他傳染性病原體，是否采用兩種或兩種以上不同作用原理的工藝進行病毒滅活，并對其工藝過程的有效性進行確認。需要關(guān)注開展病毒滅活驗證研究單位的相關(guān)資質(zhì)能力，以及所選擇的指示病毒的適宜性和滅活效果的判定。

（二）查看病毒滅活工藝文件。重點關(guān)注該標準操作規(guī)程中的病毒滅活方法和過程參數(shù)與病毒滅活驗證報告相關(guān)要求是否一致，生產(chǎn)工藝中相應(yīng)環(huán)節(jié)的產(chǎn)品是否與病毒滅活驗證報告中每個工藝用于驗證的樣品一致。應(yīng)關(guān)注病毒滅活工藝的標準操作規(guī)程是否對相關(guān)原材料的控制、防護、試驗、處理及保存做出明確的規(guī)定，且上述規(guī)定是否與病毒滅活驗證報告內(nèi)容一致。

（三）查看病毒滅活工藝記錄。重點關(guān)注記錄中病毒滅活的步驟和參數(shù)執(zhí)行是否與病毒滅活標準操作規(guī)程一致。包括查看參數(shù)范圍及數(shù)值等是否與經(jīng)驗證的工藝一致，是否對驗證過的關(guān)鍵參數(shù)（如pH值、溫度、反應(yīng)時間、射線劑量等）進行監(jiān)控及記錄。

（四）被檢查企業(yè)的現(xiàn)場應(yīng)該具備同種異體植入性醫(yī)療器械和動物源醫(yī)療器械生產(chǎn)的廠房與設(shè)施、設(shè)備。應(yīng)確保設(shè)施、設(shè)備與已驗證的病毒滅活報告中的設(shè)施、設(shè)備相符。

（五）在產(chǎn)品原材料、結(jié)構(gòu)組成、生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)場地發(fā)生變化時，是否對影響病毒滅活效果進行了評估，如相關(guān)變化影響病毒滅活工藝的效果企業(yè)應(yīng)進行再驗證。查看病毒滅活的驗證報告，是否符合《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年修訂版）》、《動物源性醫(yī)療器械注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2017年修訂版）》的要求。

（六）查看被檢查企業(yè)的生產(chǎn)、技術(shù)和質(zhì)量管理人員、操作人員的崗位任職要求、學(xué)歷證書等，應(yīng)確定生產(chǎn)、技術(shù)和質(zhì)量管理崗位人員具有相應(yīng)的生物學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)或動物醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)等專業(yè)知識，并具有相應(yīng)的實踐經(jīng)驗。

（七）從事同種異體植入性醫(yī)療器械、動物源性醫(yī)療器械的全體人員，包括清潔、維修等人員均應(yīng)當(dāng)根據(jù)其產(chǎn)品和所從事的生產(chǎn)操作進行專業(yè)和安全防護培訓(xùn)，并保留培訓(xùn)記錄。應(yīng)關(guān)注培訓(xùn)內(nèi)容與病毒滅活的內(nèi)容是否相符。

五、名詞術(shù)語

（一）同種異體植入性醫(yī)療器械：是指以人體來源組織為原料加工或組成的產(chǎn)品，例如同種異體骨、肌腱、脫細胞異體真皮等。

（二）植入性醫(yī)療器械：用于下列目的的醫(yī)療器械：

——全部導(dǎo)入人體；

——替代上皮表面或眼表面；

通過外科侵入方法，保留在上述操作位置的器械。通過外科侵入方法，部分導(dǎo)入人體保留至少30天的器械，也認作是植入性器械。

（三）病毒滅活工藝：是指生產(chǎn)企業(yè)采用特定的病毒滅活方法對其產(chǎn)品進行病毒滅活。

六、相關(guān)文件

（一）《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第64號）

（二）《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范附錄無菌醫(yī)療器械的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2015年第101號）

（三）《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范附錄植入性醫(yī)療器械的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2015年第102號）

（四）《關(guān)于印發(fā)醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范現(xiàn)場檢查指導(dǎo)原則等4個指導(dǎo)原則的通知》（食藥監(jiān)械監(jiān)〔2015〕218號）

（五）《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年修訂版）》

（六）《動物源性醫(yī)療器械注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2017年修訂版）》

（七）《血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則》（國藥監(jiān)注〔2002〕160號）

（八）YY/T 0771動物源醫(yī)療器械系列標準